Juntar todas las opciones con agua destilada. Siga estrictamente todos los procedimientos de almacenamiento y eliminación.

  • Albúmina de suero bovino (BSA): fracción V de albúmina bovina (MP Biomedicals LLC., Solon, OH, EE. UU.). Distribuidores a 4 °C.

  • Respuesta decoriónica: blanqueador germicida, el ingrediente activo es hipoclorito de sodio al 6,15 % (Clorox Expert Merchandise Agency, Oakland, CA, EE. UU.). distribuidor a temperatura ambiente.

  • Heptano (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.). Repartidor a temperatura ambiente en gabinete ignífugo.

  • Glicerol (Life Utilized Sciences, Carlsbad, CA, EE. UU.). Haga una respuesta de glicerol del 70% con 1x PBS. distribuidor a temperatura ambiente.

  • Metanol: alcohol metílico, anhidro (Mallinckrodt Baker, Inc., Phillipsburg, NJ, EE. UU.). Repartidor a temperatura ambiente en gabinete ignífugo.

  • Paraformaldehído: 10 % de respuesta estándar, grado EM, libre de metanol y RNasa (Electron Microscopy Science, Hatfield, PA, EE. UU.). distribuidor a temperatura ambiente.

  • Solución salina tamponada con fosfato (PBS), 10x (Prime quality Natural, Inc., Gaithersburg, MD, EE. UU.). Diluir a 1× con agua destilada. distribuidor a temperatura ambiente.

  • Tritón X-100 (Sigma Aldrich). distribuidor a temperatura ambiente.

  • Tampón madre de fijación de embriones: KCl 800 mM, NaCl 200 mM, TUBOS 150 mM (ácido 1,4-piperazinadietanosulfónico, Sigma-Aldrich) y EGTA 20 mM (etilenglicol bis(2-aminoetil éter)-N,N,N’,N’-Ácido tetraacético, Sigma-Aldrich) en 400 mL Cambiar el pH a 7,4 con NaOH 5 N (ver 1) y finalmente entregar una cantidad de 500 ml. Autoclave para esterilización. Distribuidores a 4 °C.

  • Solución de trabajo para la fijación de embriones: Mezcle 2 partes de agua destilada, 2 partes de paraformaldehído al 10 % y 1/2 de solución amortiguadora de fijación de embriones. Haga esto antes de cada uso a más tardar.

  • Decisión de fijación de larvas: 4% de paraformaldehído en 1x PBS. Haga esto antes de cada uso a más tardar.

  • Lectinas: Las lectinas fluorescentes obtenidas de EY Laboratories (San Mateo, CA, EE. UU.) contienen isotiocianato de tetrametilrodamina (TRITC) conjugado Canavalia ensiformis (Con A); TRITC conjugado Dolichos de dos flores (DBA); Conjugado con isotiocianato de fluoresceína (FITC) Artocarpus lanceolata (Jacalín); FITC conjugado Vicia Villosa (VVA); y conjugado con FITC Triticum vulgare (WGA). Las lectinas adquiridas de Molecular Probes (Eugene, OR, EE. UU.) contenían Alexa Fluor 488 conjugado Arachis hipogaea (PNA) y Alexa Fluor 568 conjugado Glycine max (SBV). FITC conjugado Hélix Pomatie (HPA) (Sigma Aldrich). Las lectinas se reconstituyeron a 1 mg/mL en agua destilada y se almacenaron en alícuotas de 20 µL a -20 °C (ver Recuerda 2). Todas las lectinas fluorescentes deben protegerse cuidadosamente de ellas.

  • Azúcar (Sigma-Aldrich) para inhibir la unión de lectina: norte-acetilo-D-Galactosamina (GalNAc), para la inhibición de HPA, DBA, SBA y VVA (minoristas a 4°C); norte-acetilo-D-Glucosamina (GlcNAc) para inhibir WGA (minoristas a -20°C); D-(+)-galactosa (Gal) para la inhibición de jacalin y PNA (minoristas a temperatura ambiente); D-(+)-Manosa (Man) para la inhibición de Con A (minoristas a temperatura ambiente). Haga una respuesta de stock de 1M de cada azúcar en 1x PBS. Selección de stock del minorista a -20°C.

  • Contratinción nuclear Hoechst 33342, respuesta estándar de 10 mg/mL (Molecular Probes, Eugene, OR, EE. UU.). Distribuidores a 4 °C.

  • Decisión de la asamblea: 2% 1,4-diazabiciclo[2.2.2] Octane (Dabco, Sigma-Aldrich) en glicerol al 70%. Comerciante a -20 °C.

  • Diapositivas: 75 × 25 mm Superfrost/Plus Microslides (Daigger, Vernon Hills, IL, EE. UU.).

  • Deslizamientos de cúpula: vidrio de cúpula de microscopio de 24 × 50 mm, n.º 1 (Thermo Scientific, Portsmouth, NH, EE. UU.).

  • Colador de células, malla de nailon de 70 µm (BD Biosciences, San José, CA, EE. UU.).

  • Pincel Pink Marten, Dimensión 2 (Thomas Scientific, Swedesboro, NJ, EE. UU.).

  • Vial de centelleo de 7 ml con tapa suelta (Daigger).

  • Mezclador de nutación GyroMini™ (Labnet Worldwide, Woodbridge, NJ, EE. UU.).

  • Placas de prueba de puntos de Pyrex, 9 a la derecha, 85 × 100 mm (Thomas Scientific).

  • Plato de disección con bandeja de plástico (Electron Microscopy Science).

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