INICIACIÓN

El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad reumática autoinmune que afecta principalmente a las mujeres durante la edad fértil. Los anticuerpos de inmunoglobulina G (IgG) contra el ADN de doble cadena (ds) son marcadores serológicos para el LES que a menudo replican la progresión de la enfermedad.1, 2 y están íntimamente ligados a su patogenia.3 Estos anticuerpos se consideran exclusivos del lupus porque están ausentes en muchos casos.

Sin embargo, cualquier análisis de modelos médicos y animales muestra claramente que no todos los anticuerpos anti-DNA (anti-DNA) son igualmente capaces de inducir daño tisular en el LES. La funcionalidad nefrotóxica inducida por anti-ADN podría muy bien estar asociada con variaciones de sus especificidades muy finas (revisado en la Ref. 5). Mediante el uso de dos anticuerpos monoclonales humanos (mAb) prototípicos (B3 y RH14) del mercado en nuestro laboratorio estudiamos las propiedades que hacen patógeno a un anti-ADN. Estos anticuerpos se obtuvieron de víctimas de lupus que tenían síntomas característicos de la enfermedad y poseían diversas y muchas propiedades patógenas.

ABSTRACTO

Si bien los anticuerpos de inmunoglobulina G (IgG) contra el ADN bicatenario (ds) son marcadores serológicos del lupus eritematoso sistémico (LES), no todos los anticuerpos contra el ADN (anti-DNA) pueden inducir daño tisular en la misma medida. Se sugirió que el daño renal causado por anti-ADN podría muy bien estar asociado con fluctuaciones dentro de la muy buena especificidad de los anticuerpos. En un intento por comprender sus muy buenas propiedades de unión, examinamos la reactividad cruzada de dos IgG anti-dsDNA de lupus humano monoclonal (B3 y RH14) con uno informado actualmente. Escherichia coli PolIV (una ADN polimerasa).

  • Esta Los autoanticuerpos poseen propiedades patogénicas pronunciadas en ratones inmunodeficientes excesivamente mixtos (SCID). Aunque cualquier anticuerpo inducirá proteinuria, RH14 solo induce decisiones histológicas tempranas de nefritis lúpica. Cada RH14 y B3 determinaron PolIV; no obstante, mostraron una clara diferencia en su reactividad hacia el desafiante PolIV dsDNA.
  • Aunque RH14 mostró un rasgo vital hacia lo sofisticado, la unión de B3 a PolIV complejado con dsDNA prácticamente se eliminó. Además, había uno Diferencia crucial en una de las mejores maneras, los sueros de lupus reconocieron el dsDNA desnudo y los entregados en PolIV.
  • Aunque el 67 % de los sueros de lupus eran un dsDNA desnudo específico, ≈ 90 % de estos sueros (93 % DNA de timo de ternera; 90 % oligonucleótido sintético) respondieron al refinado cuando se administró dsDNA en PolIV. Por lo tanto, la IgG anti-dsDNA también es particularmente susceptible a las víctimas del lupus. diferenciado entre aquellos que reconocen dsDNA bajo PolIV y aquellos que no. Esta distinción en la función de unión puede ayudar a dejar de lado los anticuerpos dsDNA que pueden ser más patógenos.
dsDNA nativo purificado
dsDNA nativo purificado

Aunque todos los tipos de anticuerpos inducen proteinuria, solo RH14 induce causas histológicas tempranas de nefritis lúpica detectables por microscopía electrónica en ratones con inmunodeficiencia mixta alta (SCID).

En un intento por comprender el término en términos de sus muy buenas propiedades de unión, examinamos la reactividad cruzada de RH14 y B3 con 7 proteínas de unión al ADN experimentadas (ADN polimerasas y enzimas de reparación del ADN) junto con tres no específicas (sin un secuencia específica o medida del ADN para la unión) y cuatro aglutinantes de ADN explícitos. Los tres aglutinantes de ADN no específicos, pero ninguno de los muchos aglutinantes de ADN explícitos, mostró unión al oligonucleótido artificial y, por el contrario, una unión comparable a autoanticuerpos dentro de la mitad robusta (S. Kumar y otros., observaciones no publicadas). Pensando en una de todas estas moléculas actualmente descritas –Escherichia coli PolIV: encabeza las enzimas estudiadas y es miembro de la familia Y de polimerasas de ADN recientemente caracterizada.

Estas polimerasas tienen poca procesividad, baja fidelidad, capacidad de corrección no detectable y están involucradas en eludir numerosas lesiones de ADN que bloquean la polimerasa replicativa.9 Se ha confirmado que PolIV extiende los extremos cebador-plantilla desalineados.10 PolIV es una proteína bien caracterizada812 con sus homólogos, que son enzimas clave de numerosos géneros patógenos, junto con bacilo, estafilococos, enterococos, estreptococos, micobacteria, Bordela, Neisseria, Escherichia, Klebsiella, legionela, Pasteurella, Pseudomonas, salmonela, Yersinia, treponema, plasmodio y tripanosoma.13 Avances recientes encarnan la invención de que PolIV es especial Se requiere ADN polimerasa propensa a errores para mutación de grado adaptativo.

Las personas tienen tres polimerasas de la familia Y, junto con un homólogo DinB que ahora se llama PolKappa.12 La infección bacteriana se ha implicado previamente como uno de los muchos mediadores causales de enfermedades autoinmunes (revisado en la ref. 14), PolIV es de particular interés ya que, además de ser de origen bacteriano, se ha propuesto que los homólogos de PolIV contribuyen a las estrategias adaptativas de los patógenos, junto con la variación antigénica.

Además, PolIV puede sobreexpresarse en E. coli, purificado hasta la homogeneidad y, lo que es más importante, capaz de conservar su funcionalidad distintiva de unión al ADN cuando se encuentra en una mitad robusta. Se ha confirmado la existencia de anticuerpos contra las proteínas de unión al ADN asociadas con el metabolismo del ADN en los sueros de lupus.quince Se sabe que los anticuerpos dirigidos contra tales autoantígenos reconocen epítopos dependientes de la conformación que simbolizan sitios fuertes y regiones convenientes del espacio.

Actualmente, hemos purificado PolIV hasta la homogeneidad y optimizado las condiciones que permiten que la enzima comprenda su conformación correcta cuando se encuentra en una mitad robusta. La adaptación significativa de estas condiciones en ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA) nos permitió llevar a cabo las presentes investigaciones.

Ahora mostramos que existen dos poblaciones distintas de IgG anti-DNA en víctimas de lupus: los pacientes que reconocen dsDNA en el contexto de PolIV pueden ser muy comunes en los sueros de lupus. También señalamos que subconjuntos completamente diferentes de autoanticuerpos de lupus reconocen cualitativamente ADN completamente diferentes (timo de ternero u oligonucleótido sintético) entregados en PolIV en todos los demás casos.

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